中国新皇冠诊断试剂的阳性率仅为30%~50%？质量评估报告否认了这一点

单靶试剂的阳性率为97.1%，双靶试剂的阳性率为95.4%

新的冠状病毒诊断试剂的假阴性和假阳性问题一直受到批评。中国研制的新型冠状病毒诊断试剂的现状如何？

几天前，国家卫生和安全委员会临床检测中心对“国家新型冠状病毒核酸检测室的质量”进行了评估。结果表明，对于640份/ml的病毒载量样品，单靶试剂的阳性率为97.1%，双靶试剂的阳性率为95.4%。

可以看出，我国新研制的冠部诊断试剂中只有30%~50%的核酸是阳性的，缺乏科学依据。

诊断试剂质量调查结果

为了了解我国新型皇冠诊断试剂的质量和实验室条件，国家卫生保健委员会临床检测中心选择了889个实验室，包括疾病预防控制中心、二级或三级公立医疗机构(包括综合医院、专科医疗机构、妇幼保健机构)、独立医学实验室、海关国际旅行保健中心、试剂研发制造商、科研机构等。，共覆盖31个省(包括自治区、直辖市)。共有855个实验室收到结果，其中844个实验室有有效结果(即返回的结果完整且在截止日期内)，759个实验室使用单一试剂，85个实验室使用两种或两种以上试剂和931种不同试剂。

该定性评价包含5个阳性样品，病毒基因载量分别为8×104拷贝/毫升、1.6×104拷贝/毫升、3.2×103拷贝/毫升、640拷贝/毫升和128拷贝/毫升。

“这五个样本的选择对于病毒载量高的样本和病毒载量最低的样本并不重要。阳性率必须超过3200份/毫升。主要问题在于对3.2×103份/毫升和640份/毫升的弱阳性样品的检测能力。”一位参与诊断试剂测试的人士表示。

据了解，根据临床研究数据，呼吸和非呼吸样本中的平均新冠状病毒载量为3.21×104拷贝/ml (2.21×102~4.71×105拷贝/ml)，呼吸样本中的平均新冠状病毒载量为4.33×104拷贝/ml。另一项研究显示，痰液样本浓度较高(中位数为7.52× 10份/毫升)，咽拭子样本浓度较低(中位数为7.99× 10份/毫升)。由于能获得痰的病人数量有限，鼻咽拭子取样在临床上更为常见。因此，基本评估样本基本符合临床样本中的病毒载量。

从质量评价报告可以看出，在每个临床实验室中，浓度水平高于1.6×104份/ml时，符合率可达97%以上。其次，发现701个合格的实验室(83.1%)。

3.2×103份/毫升的阳性率平均为94.6%，640份/毫升的阳性率为84.9%。

“从这些数据来看，中国新冠状病毒诊断试剂的整体质量是合格的。然而，由于不同诊断试剂选择的技术不同，不同技术之间存在差异。假阴性和假阳性是诊断试剂的客观现象。甚至有1%的可能性。”检查员说。

假阴性的原因

对于新的冠状病毒诊断试剂，假阴性的存在比假阳性更有害，因为假阴性会导致新的冠状病毒感染者被遗漏。

什么导致假阴性？

“实验室操作存在问题，诊断试剂目标也存在问题。例如，单靶诊断试剂的阳性率比双靶高1.5%。虽然这一比率仅为1.5%，但它也是假阴性的原因，导致部分漏诊。”一位诊断试剂专家说。

从上述质量评价报告可以看出，需要检测的质控品最低浓度(640份/毫升)的检出率表明，单靶试剂(华达)的检出率为97.1%，而其余8种双靶试剂的检出率为58.3%-100%，平均检出率仅为85.4%，远低于单靶的检出率。这是早期新冠核酸检测假阴性结果的主要原因之一。

“事实上，对于病原体检测，并不是说检测目标越多越好。由于引物探针之间存在干扰，反应体系中引物探针越多，干扰越严重，灵敏度越低。目前，较为成熟的病原体多目标(多重聚合酶链反应)核酸检测方法方便易用，但由于相互干扰，其灵敏度明显低于单目标(单一聚合酶链反应)检测。例如，用于肠道病毒的通用多核酸检测试剂仅具有约80%的单次聚合酶链反应临床灵敏度。卫生与健康委员会临床检验中心对国家新冠核酸检测试剂室的间质评结果也表明，新冠也不例外，多项试验的灵敏度明显低于单项试验。”上述诊断试剂专家表示。

截至4月8日，国家食品药品监督管理局已经批准了17种新的冠状病毒核酸检测试剂。在批准的产品中，不仅有一个目标(华大、仁都)，还有两个目标(伯杰、盛翔、大安等)。)或三个目标(枝江、复星等。)。

根据国家卫生安全委员会2月21日发布的《新型冠状病毒实验室检测技术指南》(国家卫生办公室疾控中心函[2020)第156号)，在进行诊断之前，要求同一样品的双靶标(ORF1ab和N)为阳性。如果单个目标为阳性，则需要对其进行重新采样和测试，以确定是否为阳性。但在临床应用过程中，实际效果如何？

“武汉市8000多份临床标本的数据显示，单靶(无论是N基因还是ORF1ab基因)阳性率比双靶(ORF1ab和N)高1.5%。”上述专家表示。

然而，上述专家也认为，在暴发之初，由于缺乏通过测序获得的序列信息，对不同病毒株之间的序列差异的理解是不够的，并且临床上迫切需要比测序更快和更简单的核酸检测方法来进行样品检测以提高诊断速度。此外，早期开发的一些核酸检测试剂质量差。为了保证准确性，建议采用双标靶和阳性双阳性的解释标准。现在看来，虽然这个“建议”减少了误诊，但却大大增加了由假阴性引起的漏检。

“正因为如此，国家食品药品监督管理局和美国食品和药物管理局最近都批准了单目标检测试剂。世卫组织发布的最新实验室检测指南也明确指出，在新感染地区检测特定目标就足够了，这将减少假阴性。”上述专家表示。

第二，假阴性的另一个原因是实验室联系。

\”假阴性检测的原因包括核酸提取和检测两个过程.\”参与质量评估的检查员说。

据了解，虽然实验室通常密切关注检测试剂的性能，但事实上，核酸提取试剂的质量也是成功检测的关键环节之一。实验室在质量评估中使用的核酸提取方法包括手动柱提取、手动磁珠提取、自动仪器柱提取、自动仪器磁珠提取和一步法等。每个实验室使用40多种核酸提取试剂。

“核酸检测是一个从提取到完成扩增检测的系统，但由于核酸提取试剂如此之多，操作程序各不相同，不同实验室的检测系统实际上是不同的。因此，即使使用相同的核酸检测试剂，由于核酸提取试剂的不同，检测的分析灵敏度将不可避免地不同。”上述诊断试剂专家表示。

在该定性评价中，发现每种检测试剂与多种核酸提取试剂结合使用。以224个实验室使用的“中山大学大安基因有限公司核酸检测试剂”为例，涉及多达23种不同厂家、不同原理的核酸提取试剂。即使在质量评估中，一些实验室也使用丙型肝炎病毒提取试剂盒、血液组织细胞核酸提取试剂盒等。提取新的冠状病毒核酸。

此外，在质量评估过程中，发现各实验室人员的操作能力存在差异，个别实验室的阳性样品未全部检出。

造成这一结果的主要原因是不同操作人员的能力和设备状态可能是影响结果的重要因素之一。例如，在一些实验室中，ORF区域的Ct值对于初始检查是39，对于再检查是32，因为第二次检查是由更有经验的操作者进行的，并且实时荧光定量聚合酶链反应仪器被替换。这表明两种结果之间的明显差异可能是由于人员的操作能力和仪器设备的状态不同。实验室应加强人员培训和仪器设备的日常维护和定期校准。

编者:朱